Correlación del ADN y del antígeno de superficie del virus de hepatitis B en tejidos de animales transgénicos

Se estudió la presencia del ácido desoxirribonucleico (ADN) que codifica para el antígeno de superficie del virus de hepatitis B (AgsHB) en los tejidos de ratones híbridos de transgénicos/BALB-c donde se había expresado el fenotipo previamente. Los órganos extraídos se evaluaron por la técnica de inmunohistoquímica, por un ELISA cuantitativo y reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para la detección del ADN viral. En los tejidos estudiados se encontró ADN viral, excepto en el intestino donde no se evidenció su presencia en ninguno de los especímenes. Con la técnica de inmunohistoquímica no se logró detectar expresión de la proteína viral en intestino, músculo y vesícula seminal, sólo muy baja expresión en cerebro. Mediante la técnica inmunoenzimática no se detectó AgsHB en músculo, intestino, cerebro y estómago. Al evaluar el suero de la totalidad de los animales por medio de la técnica inmunoenzimática y con la RPC, 100 % de los sueros fueron positivos.

A study was made on the presence of DNA coding for Hepatitis B surface antigen (HbsAg) in hybrid transgenic /Balb-c mice where the phenotype had not been expressed before. The extracted organs were evaluated by immunohistochemistry, by quantitative ELISA and polymerase chain reaction (PCR) for detecting viral DNA which was found in the studied tissues except for the intestines in which none of the species was evident. The immunohistochemical technique did not manage to detect the expression of viral protein in the intestines, muscles and seminal vesicle, only a very low expression of such protein in the brain. The immunoenzymatic technique did not detect HbsAG in muscles, intestines, brain or stomach. However, when evaluationg the sera of all the animals by immunoenzymatic technique and PCR, 10% pf tje sera were positive to viral DNA.

Método de inmunocomplejos específicos para detectar ADN del virus de hepatitis B en pacientes con antigenemias bajas

Se evaluó la influencia de las concentraciones de las partículas asociadas con el virus de hepatitis B desde el punto de vista inmunológico mediante la formación de inmunocomplejos específicos (ICE), se determinó el DNA antes y después de formado el inmunocomplejo. Se utilizaron 10 muestras serológicas de pacientes portadores crónicos con antigenemia baja (menos de 1 mg/mL), a las que se les realizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para detección del ADN viral. A cada muestra se le aplicó la técnica de ICE mediante un estándar de anticuerpos para su formación in vitro, se realizó una purificación con fenol cloroformo para ser procesado por RCP. La amplificación de las muestras con inmunocomplejos demostró que la técnica de ICE poseía capacidad de concentrar el antígeno y éste pudo ser detectado cuando no era posible determinar las concentraciones en una electroforesis de agarosa.

We evaluated the influence of the concentrations of particles associated with Hepatitis B virus from the immunologic viewpoint through the formation of specific antibody-antigen complexes, and also we determined DNA before and after the formation of the complexes. We used 10 serological samples of chronic carrier patients with low antigenemia(less than 1µg/mL) which were subjected to PCR for detecting viral DNA. The antibody-antigen complex technique was used in each sample through standard antibodies for the complex to be formed in vitro, then purification with phenol chrololform to be PCR-processed. The amplification of samples with the antibody-antigen complexes showed that this technique was able to concentrate antigens, so it could be detected when it was impossible to determine antigen concentrations in an agar electrophoresis.

Evaluación bioquímico-inmunológica de infectados crónicos por el virus de la hepatitis B: Comportamiento de la respuesta inmune en sus contactos familiares

La infección crónica por el virus de la hepatitis B (VHB) es una clara e importante causa de morbilidad y mortalidad en el mundo. Un importante problema para el control y la erradicación de la enfermedad es la exisniveles de anti-AgsHB, después del esquema completo de vacunación en consanguíneos y no consanguíneos, resultó ser de tipo negativa en los primeros e infirió la existencia de genes compartidos relacionados con el control de la respuesta anti-AgsHB y con el aclaramiento viral.

Chronic infection by HBV is a clear and important cause of morbidity and mortality worldwide. An important problem, for the control and eradication of this disease is the existance of chronic HBV carriers and their family contacts. A biochemical and immunological study of chronic HBV reservoirs were conducted to determine the relation between the concentrations of HBV surface antigen, detected and quantified by the ELISA method, and the serum viral DNA concentrations; as well as the correlation between the levels of antigenemia and the transaminase values (ALAT). A direct linking was proved between viral DNA and HbsAg levels and also between antigen concentration and ALAT values. A significant percent of carriers with high viral charges and normal enzymatic levels was observed. The performance of immune response to HBV in those persons living with the chronic HBV-infested subjects was analyzed and the frequency of occurence of immune, sensitive and infected persons was estimated resulting in a high number of infected persons and persons living with the chronic patients without protection. Qualitative and quantitative ELISA were used to assess the response of antibodies to HbsAg, induced by vaccines or by normal contacts of blood related and non-related persons in the family, but there was no difference among them. The HbsAg concentration of the carrier was associated with levels of antibodies to HbsAg; after completion of the vaccination program in blood related and non-related subjects, then the association was found to be negative in the former and the existance of shared gens linked to the control of anti-HbsAg response and viral clearing were infered.

Durabilidad de la respuesta inmune contra el vhb en niños de un círculo infantil en Cuba

El Ministerio de Salud Pública de Cuba se ha propuesto la eliminación para el año 2000 de la hepatitis viral tipo B. Para cumplir este objetivo lleva a cabo un Programa Nacional que comenzó en 1991 con la vacunación de los niños nacidos de madres portadoras de hepatitis B y posteriormente se amplió a todos los recién nacidos a partir de 1992. Uno de los parámetros para evaluar la inmunogenicidad de una vacuna es la durabilidad de la respuesta posvacunal, que permite demostrar, además, la necesidad o no de una dosis refuerzo. Tomando en consideración la importancia de este tipo de estudio se realizó la cuantificación de los niveles de anticuerpos contra el VHB (anti-AgsHB) en niños pertenecientes a un círculo infantil, vacunados según el Programa Nacional de Vacunación. Éstos estaban distribuidos por años de vida: primer año (I): 19 niños, segundo año (II): 10, tercer año (III): 31, cuarto año (IV): 24, y en el quinto año (V): 22, para un total de 106 niños. Las muestras serológicas se evaluaron mediante el método inmunoenzimático ELISA, en el Departamento de Inmunología del Instituto de Ciencias Básicas y Preclínicas "Victoria de Girón" (ICBP). En cada grupo estudiado se determinó la proporción de niños con seroprotección (I0 Ul/L o más) e hiperrespuesta (100 Ul/L o más). Se calculó además la media aritmética. Los niveles de seroprotección e hiperrespuesta fueron superiores a 93 y 76 %, respectivamente. La media aritmética (X) estuvo por encima de 181 Ul/L en todos los grupos estudiados.

The Ministry of Public Health of Cuba sets out to wipe out viral hepatitis B for the year 2000. To attain this goal, it implemented a National Program which started in 1991 with the immunization of children from Hepatitis B carrier mothers and was extended to all neonates from 1992 on. One of the parameters to evaluate immunogenicity of a vaccine is durability of post-vaccine response that permits to prove whether a reinforcement dose is needed or not. Taking the importance of this type of study into account, the levels of antibodies to HBV (anti-HbsAg) were quantified in the children of a day-care center who were vaccinated as part of the National Immunization Program. These children were distributed by years of life: First year(I), 19 children; second year (II) 10; third year (III) 31; fourth year (IV) 24; and firth year (V) 22, totalling 106 children. The serological samples were assessed by ELISA in the Department of Immunology of the "Victoria de Girón" Institute of Basic and Pre-clinical Sciences. In each studied group, the number of children with seroprotection (10 UI/L or higher) and hyperesponse (100 UI/L or higher) were determined. Additionally, the arithmetic mean was calculated. The levels of seroprotection and hyperesponse were over 93 and 76% respectively. The arithmetic mean was over 181 UI/L in all the studied groups.

Respuesta pos-vacunal y persistencia de anticuerpos contra el virus de la hepatitis B en niños asmáticos y no asmáticos vacunados con eberbiovac-HB

Se estudió la presencia de los anticuerpos anti-AgsHB en 1 280 niños con edades entre 7 meses y 3 años, que recibieron la vacuna cubana antihepatitis B, Heberbiovac-HB al nacimiento, al mes y 6 meses de edad dentro del Programa Nacional de Inmunización en Cuba. Se determinó la presencia del AgsHB y se cuantificaron los anticuerpos en el suero mediante métodos ELISA sandwich, desarrollados y validados en el Laboratorio de Inmunología. Teniendo en cuenta el tiempo transcurrido desde el final de la vacunación, la muestra se dividió en 3 grupos: entre 7 meses y 1 año, entre 1 y 2 años, y entre 2 y 3 años. Ninguno de los niños presentó marcadores de infección y los porcentajes de seroprotección fueron 96,6 en el grupo de 7 meses a 1 año, y de 100 en los grupos de 1 a 2 y de 2 a 3 años. Los porcentajes de niños con cifras de anti-AgsHB superiores o iguales a 100 UI/L fueron de 93,1, 90,7 y 77,8, respectivamente. Las medias geométricas de anti-AgsHB fueron de 1 056, 699 y 483 UI/L para cada grupo. Se encontraron diferencias significativas en los porcentajes de seroprotección, hiperrespuesta y medias geométricas de anti-AgsHB cuando se compararon estas variables entre niños con historia de asma bronquial (687,8, 620,2, y 402,9 UI/L) y otros sin este antecedente en los 3 grupos (1 341, 1 047,8, y 528,3 UI/L); las concentraciones fueron mucho más elevadas en los no asmáticos. Estos resultados podrían indicar que aún con antígenos no alergénicos se puede inducir una respuesta a predominio Th 2 en asmáticos y que por causa de la citofilia de las inmunoglobulinas de clase E los anticuerpos no son detectados, o bien que la respuesta es de hecho menor como consecuencia del carácter de disreactor de los asmáticos. Se concluye que la inmunogenicidad de la vacuna en una población abierta es comparable a la de los estudios controlados, y que no se necesita dosis de refuerzo al menos después de transcurridos 4 años de finalizado el esquema, si se tiene en ...

The presence of anti-AgsHB antibodies was studied in 1 280 children aged from 7 months to 3 years, who were administered the Cuban anti-hepatitis B vaccine Heberbiovac HB when they were born, at 1 and 6 months of age as part of the National Immunization Program in Cuba. AgsHB was detected and serum antibodies were determined by ELISA sandwich methods, developed and validated in the Immunology Laboratory. Considering the time elapsed from the end of the vaccination, the sample was divided into 3 groups: 7 months to 1 year, 1-2 years, and 2-3 years of age. None of the children exhibited infection markers and seroprotection percentages were 96.6 in 7months to 1 year old group, and 100% in 1-2 years-old and 2-3 years-old groups. The percentages of children with anti-HbsAg values equal to or over 100 UI/L were 93.1%, 90.7% and 77.8% respectively. The geometric means of anti-HbsAg were 1 0567, 699 and 483 UI/L respectively. Significant differences were found in seroprotection and hyperesponse percentages and in anti-HbsAg geometric means when comparing these variables between children with bronchial asthma history (687.8, 620.2 and 402.9 UI/L) and non-asthmatic children of the 3 groups(1 341, 1 047.8 and 528.3 UI/L); the concentrations were much higher in non-asthmatics. These outcomes could signal that even with non-allergenic antigens, a predominant Th2 response may be induced in asthmatic children and that wither antibodies are not detected due to IgE cytophilia or response is in fact lower as a result of the disreactor nature of the asthmatics. It is concluded that immunogenicity of the vaccine in a population is comparable to that of the controlled studies and that a reinforcement dose is not needed at least 4 years after the completion of the immunization schedule if one takes into account the kinetics of anti-HbsAg elimination. A controlled study of asthmatic populations is required to verify the achieved results with due explanations.

Efectividad absoluta y relativa de la vacunación antihepatitis B en niños de Quillabamba, Perú, 1997-1999

Conociendo la importancia que la Organización Panamericana de la Salud le concede a la hepatitis B como problema de salud en algunas regiones de América del Sur y atendiendo a las recomendaciones de la comisión responsable del control de este tipo de hepatitis en el Perú, el Ministerio de Salud de este país inició en 1996, la vacunación de menores de 1 año en áreas de alta e intermedia endemicidad. En este trabajo se realizó un estudio concurrente de 115 niños inmunizados con la vacuna Heberbiovac HB (10 µg/dosis, 0-2-4 meses) integrada al Programa Ampliado de Inmunizaciones en Perú y 77 niños no vacunados. A todos se les realizó estudio serológico para conocer prevalencia de infección y de portadores del VHB ( AgsHB y anti-AgcHB) y cuantificación del anti-AgsHB, con el uso de métodos inmunoenzimáticos de la Organon Teknika. En ninguno de los niños vacunados existió evidencia de infección por el virus B, para una efectividad de 100 %. Los porcentajes de seroconversión, seroprotección e hiperrespuesta entre los vacunados fueron de 99,1, 98,3 y 42,6 respectivamente. Entre los no vacunados se encontraron marcadores de infección anterior en 31,1 % y 3,9 % fue positivo al AgsHB. Teniendo en cuenta la edad promedio de aparición de los marcadores y los niveles del AgsHB se pudo pensar que predominaba un patrón de trasmisión horizontal que ameritaba el estudio de conviventes y la evaluación de vías inaparentes de infección. A partir del impacto obtenido con la vacunación, se recomendó vacunar a todos los niños que lo necesitaban aunque se encontraran fuera del rango de edad establecido por el Programa Ampliado de Inmunización, así como a los conviventes donde se demostró circulación viral.

Knowing the importance that the Pan-American Health Organization gives to Hepatitis B as a health problem in some regions of South America and bearing in mind the recommendations of the commission in charge of the control of this hepatitis in Peru, the Ministry of Health in this country started a mass vaccination of under one year-old infants in highly and medium endemic areas. This paper sets forth a concurrent study of 115 children immunized with Heberbiovac HB (10 µg/dose, at 0, 2 and 4 months) which incorporated the Extended Immunization Program in Peru and 77 non-vaccinated children. All of them were serologically analyzed to find out prevalence of infection and of HBV carriers (HbsAg and anti-HbcAg) and their anti-HbsAG was quantified using immunoenzymatic methods of Organon Teknika. There was no evidence of virus B infection in the children accounting for 100 % effectiveness. The percentages of seroconversion, seroprotection and hyperesponse among the immunized children were 99.1, 98.3 and 42.6 respectively. Markers of previous infection were found in 31.1 % of children and 3.9 were HbsAg positive. Considering the average age at which markers occur and the levels of HbsAg, it was thought that a pattern of horizontal transmission predominates, which supports the study of people living in the same place as the infested subject and the assessment of non-evident route of infection. On the basis of the impact of vaccination, it was recommended to immunize all children in need of, even if they are not included in the age range set for the Extended Immunization Program as well as to people living with these children if viral spread is detected.